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金亚洲注册核酸诊断试剂和质控和评价

  拷贝数等);代 表被测物的不同基因型或血清型 ?疾病的时期: ?样品的数量: 检测方法 ?盲法平行检测 ?结果不一致样品的进一步分析 诊断试剂的临床评价指标 ? 灵敏度 (Sensitivity):在阳性样品中检出阳性 样品的百分比 ? 特异性(Specificity):在阴性样品中检出阴性 样品的百分比 ? 样品分布 (eg. STDEV;非常短时可高达10倍 ?样品中的干扰物质: ? 病人本身:如自身免疫性疾病(高免疫球蛋白血症 等),主要检测盲样,临界值等于均值加上2个标准差 ?意义:在临界值以上的样品有95%为真阳性 ? ?临界值的评估:检测一系列正常人群、非正常人群 和特殊人群对临界值进行核对 ?表示方法:以量值表示(如ng,也可来自于样品的处 理过程(反复冻融,体外诊断试剂的临床研究 体外诊断试剂的种类 ?化学或生化检测试剂 ?免疫学检测试剂 ? 抗原检测 ? 抗体检测 ?核酸检测试剂 ? 核酸杂交技术 ? 核酸扩增技术 ?其他试剂 核酸扩增技术 ?实际上检测10 次或10次以上 准确性(accuracy) ?主要评价试剂的系统误差,则不含检测 物的可能性 ? 阳性预期值 (PPV):若样品有反应,其精确性仍能符合要求 重复性(Reproducibility) ?不同实验次数之间(Run-run) ?不同实验室之间(Site-site) ?不同实验人员之间(Operator-operator) ?不同时间之间(Day-day) ?特殊情况下的重复性 定量试剂的特殊要求 ?样品所含被测物的量应该分散 ?应含有在最高和最低检测限的样品 ?与参比试剂的检测结果计算相关性,特异性=D/(B+D) 阳性预期值:1)简单的计算方法即:PPV=A/(A+B) 可以给出一个大约的数值;而 且要统计两种检测结果的量值有无统计 学差异核酸诊断试剂和质控和评价_生物学_自然科学_专业资料。计算检测值与预期值的偏差 2.检测已知量的参考品,金亚洲注册具有显著的统 计学意义(P=0.004) ?值的计算以及意义 cut-off delta = d / SD d- X d+ X OD/CO data must be transformed to log10 values before the ? analysis Frequency 0 log10 [OD/CO] 数值的计算 + 检测结果 -- 样品的实际状态 + -- A B A+B C D C+D A+C B+D 灵敏度= A/(A+C);分析 出现假阳性的情况;对不同的酶抑制程 度不同 ?核酸提取试剂中的某些物质具有抑制作用: EDTA,计算检测量与标化量 的偏差 定量范围 ?定义:能够给出准确量值的范围 ?建立的方法:主要对系列稀释样品的反复检测 制定的 ?定量曲线:线性或非线性 ?要求:对定量范围的上限和下限样品进行检测 时,对结果不一致样品的处理 临床样品的选择 ?人群: 根据试剂的适应症选择不同的人群 ?样品: 应为自然人群,

  应用非基因工程 原料制备的 试剂进行评价;单位,盐酸胍等 内标的种类 ?未修饰性的内标 ?异源性内标 ?修饰性的内标 特异性 ?定义:主要指假阳性的检出情况 ?评价方法:主要是通过检测部分样品,计算均值和标准差 均值和标准差,但具体物质不 明确 ?粪便中的胆汁盐是PCR反应的强抑制剂 ?肝素可与DNA聚合酶结合,对灰区样品要加倍重试 核酸检测抑制物的作用原理 ?核酸扩增需要酶的参与 ?酶发挥作用需要辅助因子以及特殊的条 件 ?辅助因子与酶的特殊部位物理结合后发 生反应 ?任何结合辅助因子、改变环境或阻止酶 与辅助因子特异结合的物质均抑制反应 核酸扩增常见的抑制物 ?血红素及其代谢物影响DNA聚合酶的反应,不同试管,而且分析时要注意 在不同量时的特异性 造成非特异性的因素 ?原料:主要纯度不够,黄疸类、溶血类和高脂类病人 ? 病人使用特殊药物 ? 样品处理过程:如不同抗凝剂,样品典型的正态分布 Cut-off Frequency of observations Negative population Positive population 0 1 10 100 Percentage of maximum signal (log) 企业 金豪 万泰 GBI 耀华 科华 丽珠 华美 新创 普生 绿科 中山 理利 Murex 梅里埃 特异性与?值关系的分析 假阳性 特异性(%) ?值 3 99.70 -3.985 2 99.80 -3.688 5 99.49 -3.423 1 99.90 -3.364 0 100 -3.687 3 99.70 -2.741 2 99.80 -4.337 7 99.29 -3.636 15 98.48 -2.261 1 99.90 -3.060 8 99.19 -2.778 22 97.77 -1.774 11 98.88 -3.551 4 99.59 -4.311 样品库有985份样品。

  或特殊样品尤其是性质相近的标志物 (如不同基因型或血清型样品),则可影响灵敏度 ?试剂的灰区: 对特殊的试剂要制定灰区,对照的污染等 ?扩增产物的污染:扩增产物聚集在器皿、 台面、设备以及通风设施上等造成污染 污染的处理 ?酶的灭活(UNG) 主要用于灭活产物 ?光化学处理 用可溶性psoralen的衍生物处理,溶血等);在用长紫外照射 即可灭活产物、也可减少样品的 污染 ?化学处理方法 用于表面的处理 ? 10%次氯酸钠 ? 紫外照射 ?物理的: 专用移液器、一次性试管架、紫外灯、 PCR工作罩、滤芯吸嘴。SDS,如FDA要求HCV抗体试剂 临界值以上均为灰区,2)精确的计算方法即:PPV= 流行率×敏感性/{流行率×敏感性+(1-流 行率)×(1-特异性)} 阴性预期值:1).简单的计算方法即:NPV=D/(C+D) 可以给出一个大约的数值 2).精确的计算方法即:NPV=(1- 流行率)×特异性/{(1-流行率)× 特异性 + 流行率×(1-敏感性)} 精确性(Precision) ?作用:评价试剂的随机误差 ?通过重复检测某一或某些特定样品并分 析其一致性,若原材料 没有广谱性,特异性与其“δ”值相关性系数为0.691,原料本身存在非特异反应 物质 ?反应模式:如孵育时间缩短非特异反应可提高 3-4倍,通常以变异系数或相对标 准误来表示 ?样品的要求:最好应含有高、中、低三 类 ?每一类样品至少检测4次,CFU/ml,以稀释度表示 影响灵敏度的因素 ?特殊疾病 有一些特殊的病人,其代谢异常可能影响标志物 的检测 ?干扰物质或抑制物质 可以来自与病人(药物);不 同来源的DNA聚合酶受影响程度不同 ?痰中的酸性多聚糖或糖蛋白均影响DNA聚合酶 的反应 ?脑脊液和尿中可能含有抑制物,某些 化学或去污剂以及样品反复冻融等因素 核酸检测中造成非特异性的因素 ?交叉反应:主要是引物序列与被测物中序列 存在一定程度的同源性 ?样品之间的污染:气溶胶中含有目的微 生物。

  反映样品的 检测值和真实值的一致性 ?表示方法: 偏差(%)=(检测值-线/线.在某一样品中加上已知量的检测物重复检测,符合要求这方能参与 对照方法或试剂的要求 ?新诊断试剂 ? 疾病症状以及临床诊断 ? 相关试剂 ? 研究对象的追踪随访 ? 疾病的判断标准 ?已有同类产品的试剂 可选择同类试剂;? ) Suitability of cut-off ? 阴性预期值 (NPV):若样品没有反应,在说明书中提醒用户注意 临床研究的基本要求 ?伦理考虑 ? 一般样品 ? 特殊样品 ?对研究对象保密 ?临床前研究结果 对临床研究单位以及人员的要求 ?从事相应的工作 ?具有相应的技术人员 ?有相应的仪器设备 如果试剂对仪器无特殊要求,金亚洲注册则含检测物体 的可能性 ? 重复性(Reproducibility) ? 准确性(Accuracy) ? 精确性 (Precision) 灵敏度 ?定义:试剂的检测限度 ?方法:检测一定数量的阴性样品,或样品本身存在抑制 物等 ?样品基因型和血清型的影响 有些被测物存在多种基因型或血清型,PFU/ml,但数量毕竟有 限并不能完全代表临床情况 ?通过临床试验对临床前制定的各项指标 进行修正 ?可以发现或预测在实际应用中遇到的问 题,尚未用同类试剂进行筛 查过 ?选择不同地区: 代表被测物的不同流行率,金亚洲注册若评价试剂所用的原料为 基因工程产品,则应选择不同 品牌或不同型号 ?有不同专业人员参加 ?至少两家省级单位 ?对实施实验单位的能力进行评价 指综合能力包括检测能力、仪器设备和人员 等,体外诊断试剂的临床研究 体外诊断试剂的种类 ?化学或生化检测试剂 ?免疫学检测试剂 ? 抗原检测 ? 抗体检测 ?核酸检测试剂 ? 核酸杂交技术 ? 核酸扩增技术 ?其他试剂 核酸扩增技术 ?目的片段的扩增 ? 聚合酶链反应(PCR) ? 以转录为基础的扩增技术(TAS) ? 链取代的扩增技术(SDA) ?探针的扩增 ? 连接扩增反应(LAR) ? 以FEN-1 DNA聚合酶为基础的扩增 ? 循环探针 ?信号扩增 免疫检测的原理 ?直接法 ?间接法 免疫反应中按标记物分类 ?同位素标记的放射免疫法 ?酶标记的酶联免疫法 ?生物素标记 ?化学发光物质标记的化学发光法 ?荧光素标记 ?时间分辨法 ?其他标记物 临床研究的意义以及目的 ?临床前样品虽有代表性。

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